365真人

接待您拜候武汉艾美捷科技无限公司官方网站!
站点舆图 办事热线:400-6800-868
  • 产物
  • 文章

TECHNICAL COLUMN

进修资本

以后地位:365真人 > 进修资本

组卵白提取

宣布者:艾美捷科技    宣布时辰:2021-05-13     
分享到:


组卵白有四品种型:H2A、H2B、H3、H4,组卵白是染色体根基布局卵白,因富含碱性氨基酸 Arg 和 Lys 而呈碱性,可与酸性的 DNA 慎密连系。由于组卵白是偏碱性的,是以咱们能够利用酸法来提取。


尝试操纵步骤:


1、将 3-5×105 个细胞种到 6 孔板中,接着停止本身须要的尝试处置,处置竣事后起头收卵白,先用 1×PBS 将细胞洗两次,每次吸尽上清。


2、每孔插手 200ul NETN 裂解液,冰上裂解 15min


High salt NETN buffer


母液

配制 100ML


20mM Tris,PH=8.0

1M

2ml


500mM NACL

5M

10ml


0.5% NP-40

20%

2.5ml


1mM EDTA

0.5M

200ul


H2O


85.3ML


临用前加卵白酶按捺剂





3、用细胞刮刮细胞,将细胞搜集于 1.5mlEP 管中,1500g,4℃,离心 10min


4、离心竣事后能够在管底看到一小团靠近通明的积淀,谨慎吸尽上清,用 1ML NETN buffer 洗积淀一次或两次,1500g,4℃,离心 10min


5、吸尽上清,谨慎吸,积淀轻易被吸走,插手 0.2M HCL 100ul (浓盐酸的浓度为 12M)冰水裂解 30min,(30min 后积淀变成一个红色的小团块)


6、12000RPM,4℃,15min 离心,此时组卵白已消融在上清中,将上清转移到新的 EP 管中,插手 20ul 的 1M Tris ph=8.0 中和酸性(5 倍体积的 HCL 加 1 倍体积的 1M Tris PH=8.0, 如 100ul 的上清中,可插手 20ul 的 1M Tris。


若中和不充实,则鄙人一步插手 SDS 的时辰溶液会显现黄色,可适当补加 1M Tris PH=8.0,只到溶液规复蓝色)。


7、可用考马斯法测卵白浓度


8、用 SDS 煮卵白,100℃,10min.。接上去可停止 Western blot 尝试。


9、跑胶时,上样量为 5ug 时比拟适合。能够按照本身的详细尝试停止调剂。


上一篇:组卵白印迹

下一篇:上面不链接了

手艺专栏分类
比来促销 MORE
特点产物 MORE
现货产物 MORE
  • 高品德保证 进步前辈的出产研发手艺
  • 高性价比 价宜质优,性价比高
  • 100%保证 从采办到利用,安心无忧
  • 宁静运输 完美的掩护办法宁静运输

微信扫码在线客服

微信征询

天下收费手艺撑持

400-6800-868

在线客服