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缓冲液和储蓄溶液

宣布者:艾美捷科技    宣布时候:2021-05-10     
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PBS,三乙醇胺缓冲液(TBS) 和三乙醇胺-吐温(TBS Tween) 缓冲液的配制


PBS (10x)

80g 氯化钠

2.0g 氯化钾

14.4g 磷酸氢二钠

2.4g 磷酸二氢钾

插手800ml 超纯水,混匀,用纯盐酸调理pH 值至7.4,而后插手超纯水至1L。

10倍三乙醇胺缓冲液

24.23g 氨基丁三醇氯化氢

80.06g 氯化钠

插手800ml 超纯水,混匀,用纯盐酸调理pH 值至7.6,而后插手超纯水至1L。


三乙醇胺-吐温缓冲液(含0.1% 的吐温20)


配制1L 溶液:取100ml 10 倍三乙醇胺缓冲液加890ml 超纯水,再插手10ml 吐温20 (10%)


吐温20 很黏稠会粘在量取的枪头上,要肯定插手三乙醇胺缓冲液的变性剂体积充足。倡议利用10% 的溶液停止配制,如许会比用未浓缩
的吐温20 溶液轻易配制。


卵白质印迹


裂解液


这些缓冲液可保管于4°C 几周,分装后冻存于-20°C 能够保管一年。


乙基苯基聚乙二醇(NP-40)缓冲液


150mM 氯化钠

1.0% 乙基苯基聚乙二醇(也可用0.1% 聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100) 取代)

50mM 三羟甲基氨基甲烷-氯化氢(Tris-HCl),pH 值8.0

卵白酶按捺剂

RIPA缓冲液(喷射免疫积淀测定缓冲液)

150mM 氯化钠

1.0% 乙基苯基聚乙二醇或0.1% 聚乙二醇辛基苯基醚

0.5% 去氧胆酸钠

0.1% SDS(十二烷基硫酸钠)

50mM 三羟甲基氨基甲烷-氯化氢,pH 值8.0

卵白酶按捺剂


RIPA 缓冲液的变机能力要强于乙基苯基聚乙二醇或聚乙二醇辛基苯基醚,因其活性成份包罗了离子型去垢剂SDS 和去氧胆酸钠,在核膜降解和细胞核提取时很是有效。RIPA 缓冲液发生的背景很低,但其也可以使卵白酶变性。


10% 的去氧胆酸钠贮存液(5 克溶于50ml)必须避光保管。


三羟甲基氨基甲烷-氯化氢缓冲液


20mM 三羟甲基氨基甲烷-氯化氢,pH 值7.5

卵白酶按捺剂

三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液(用于细胞骨架卵白)

10mM 三羟甲基氨基甲烷,pH 值7.4

100mM 氯化钠

1mM 乙二胺四乙酸

1mM 乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸

1% 聚乙二醇辛基苯基醚

10% 甘油

0.1% 十二烷基硫酸钠

0.5% 去氧胆酸钠

卵白酶按捺剂

10% 的去氧胆酸钠贮存液(5 克溶于50ml)必须避光保管。


非变性裂解缓冲液


20mM 三羟甲基氨基甲烷-氯化氢,pH 值8.0

137mM 氯化钠

10% 甘油

1% 乙基苯基聚乙二醇/聚乙二醇辛基苯基醚

2mM 乙二胺四乙酸

卵白酶按捺剂

(用于可溶于变性剂的抗原,其自然型被响应抗体辨认。聚乙二醇辛基苯基醚可替换乙基苯基聚乙二醇无去垢剂型可溶卵白裂解液)

5mM 乙二胺四乙酸

0.02% 叠氮化纳

磷酸盐缓冲液

卵白酶按捺剂

一些可溶性卵白不须要利用去垢剂。此缓冲液可用于机器裂解细胞,如用打针器频频抽压或用Dounce 匀浆机匀浆。


变性裂解液/用于不容于去垢剂的抗原的裂解液


1% 十二烷基硫酸钠

5mM 乙二胺四乙酸


利用前插手:

10mM 的二硫苏糖醇或β-巯基乙醇

卵白酶按捺剂

15U/ml DNA 酶I


仅辨认变性卵白的抗体不会与自然型卵白连系。在搜集和裂解细胞时,要将重悬细胞的变性裂解缓冲液加热。此方式也可用于非离子型去垢剂没法提取的抗原。利用DNA 酶I 有助于从染色质中抽提卵白。


电泳和印迹缓冲液


Laemmli 2 倍缓冲液/上样缓冲液

4% 十二烷基硫酸钠

10% 2-巯基乙醇

20% 甘油

0.004% 溴酚蓝

0.125M 三羟甲基氨基甲烷-氯化氢

测定pH 值,调剂pH 值至6.8


电泳缓冲液


25mM 三羟甲基氨基甲烷碱

190mM 甘氨酸

0.1% 十二烷基硫酸钠

测定pH值,若有须要的话,调剂pH 值至8.3


转移缓冲液(湿式)

25mM 三羟甲基氨基甲烷碱

190mM 甘氨酸

20% 甲醇


若有须要的话,pH 值应调理至8.3

大于80 kDa 的卵白,倡议十二烷基硫酸钠终浓度为0.1%。


转移缓冲液(半干式)

48mM 三羟甲基氨基甲烷

39mM 甘氨酸

20% 甲醇

0.04% 十二烷基硫酸钠


封锁缓冲液

5% 牛奶或BSA(牛血洁白卵白)

插手三乙醇胺-吐温缓冲液。充实夹杂后过滤。如不过滤集聚集成雀斑,这类小暗点会在显色时影响印迹的结果。


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