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彗星分析一站式解决方案-专业彗星分析试剂盒

发布者:艾美捷科技发布时间:2021-02-01

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       由于环境因素和细胞内正常的新陈代谢过程,DNA损伤每天以每个细胞1000到100万个分子损伤的速度发生。虽然这只占人类基因组约60亿个碱基(30亿个碱基对)的一小部分,但关键基因的未修复损伤可能会阻碍细胞发挥其功能的能力,并显著增加癌症的可能性。

 

彗星实验

 

       彗星实验(Comet assay)也被称为单细胞凝胶电泳实验(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一种超灵敏的单细胞水平上检测DNA损伤的技术,可以检测到1.657×10-15中0.1个DNA的断裂,甚至检出自然光照射体外淋巴细胞1h后引起的DNA损伤。在电泳场下,损伤的细胞DNA(包含碎片和链断裂)从完整的DNA中分离出来,在显微镜下形成典型的“彗星尾巴”形状。DNA损伤的程度通常是通过测量彗星尾巴来目测的,也可以使用图像分析软件来测量各种参数。

 

      【彗星分析应用领域】:主要还是在细胞凋亡的研究,肿瘤/癌症研究,毒理学研究,环境污染监测,临床诊断与治疗监测。

 

      下面就由小艾为您分享一下彗星分析实验(Comet assay)怎么做?

 

      《》First,选择专业的彗星分析试剂盒:

 

      根据您的实验用量,可以选择不同规格的产品:

 

产品名称 货号 规格 说明
Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片)
(最常用)
STA-350 15 assays(5片) 彗星分析试剂盒,3孔
STA-351 75 assays(25片)
STA-351-5 5*75 assays(5*25片)
Comet Assay Kits, 96-Well(96孔玻片)
(高通量筛选)
STA-355 96 assays(1片) 彗星分析试剂盒,9孔
STA-355-5 5*96 assays(5片)

 

      * 每个玻片表面都经过特殊处理,一旦电泳过,即使玻片上有未使用的孔,也不能用于第二次实验。

      * 3孔和96孔玻片,均可以单独购买,请咨询艾美捷科技。

 

      艾美捷向您推荐Comet Assay kit彗星分析试剂盒内提供了彗星分析所需的所有必需试剂,包括裂解液、彗星分析低熔点凝胶、DNA荧光染料、彗星分析玻片以及其它试剂。助您轻松完成彗星实验分析。

 

      【英文说明书】 后仔细阅读哦~

 

      *(中文版说明书,已安排翻译中,敬请期待)

 

      【2020年最新发表文章】

      Siemionow, M. et al. (2020). Transplantation of Dystrophin Expressing Chimeric (DEC) Human Cells of Myoblast/MSC Origin Improves Function in Duchenne Muscular Dystrophy Model. Stem Cells Dev. doi: 10.1089/scd.2020.0161.

      Lammert, C.R. et al. (2020). AIM2 inflammasome surveillance of DNA damage shapes neurodevelopment. Nature. doi: 10.1038/s41586-020-2174-3.

      Shibayama, Y. et al. (2020). Aberrant (pro)renin receptor expression induces genomic instability in pancreatic ductal adenocarcinoma through upregulation of SMARCA5/SNF2H. Commun Biol. 3(1):724. doi: 10.1038/s42003-020-01434-x.

      Han, J. et al. (2020). Elevated CXorf67 Expression in PFA Ependymomas Suppresses DNA Repair and Sensitizes to PARP Inhibitors. Cancer Cell. doi: 10.1016/j.ccell.2020.10.009.

      Hays, E. et al. (2020). The SWI/SNF ATPase BRG1 stimulates DNA end resection and homologous recombination by reducing nucleosome density at DNA double strand breaks and by promoting the recruitment of the CtIP nuclease. Cell Cycle. doi: 10.1080/15384101.2020.1831256.

      Ibnu Rasid, E.N. et al. (2020). Effect of Dioscorea hispida var. Daemona (Roxb) Prain & Burkill on Oxidative Stress and DNA Damage in the Liver of Pregnant Rats. Int J Biomed Sci. 16(3).

      Le, B.V. et al. (2020). TGFβR-SMAD3 Signaling Induces Resistance to PARP Inhibitors in the Bone Marrow Microenvironment. Cell Rep. 33(1):108221. doi: 10.1016/j.celrep.2020.108221.

      Klotz-Noack, K. et al. (2020). SFPQ Depletion Is Synthetically Lethal with BRAFV600E in Colorectal Cancer Cells. Cell Rep. 32(12):108184. doi: 10.1016/j.celrep.2020.108184.

      Ito, S.S. et al. (2020). Inhibition of the ATR kinase enhances 5-FU sensitivity independently of non-homologous end-joining and homologous recombination repair pathways. J Biol Chem. doi: 10.1074/jbc.RA120.013726.

      Klak, M. et al. (2020). Irradiation with 365 nm and 405 nm wavelength shows differences in DNA damage of swine pancreatic islets. PLoS One. 15(6):e0235052. doi: 10.1371/journal.pone.0235052.

      Khalil, A.M. et al. (2020). Association between Mobile Phone Using and DNA Damage of Epithelial Cells of the Oral Mucosa. J Biotechnol Biomed. 3(2020): 50-66. doi: 10.26502/jbb.2642-91280027.

      Wang, Y. et al. (2020). Targeting therapeutic vulnerabilities with PARP inhibition and radiation in IDH-mutant gliomas and cholangiocarcinomas. Sci Adv. doi: 10.1126/sciadv.aaz3221.

      Fang, Y. et al. (2020). Epigenetic dysregulation of Mdr1b in the blood-testis barrier contributes to dyszoospermia in mice exposed to cadmium. Ecotoxicol Environ Saf. 190:110142. doi: 10.1016/j.ecoenv.2019.110142.

 

      《》Second, 彗星分析电泳模式选择

 

电泳模式 检测类型 电泳时间 说明
TBE电泳(中性电泳) 检测单链双链DNA的断裂 推荐
10-15 mins
分析细胞凋亡的首选方法,可使用尾巴长度而非尾矩进行数据分析。
碱性电泳 检测单链双链DNA的断裂,AP位点损伤在内的所有DNA 损伤 推荐
15-30mins
灵敏度最高!

 

      * 实验过程中的各类缓冲液都需要4℃预冷。

 

      关于电泳电压:以上2种电泳模式,均推荐参考您实验室电泳槽两极间的举例,按照1V/cm的标准设置电压。举例,如果电泳槽两极举例是35cm,您需要使用35V的电压来执行电泳。

 

      实验环境:为避免紫外线对细胞样品造成额外损害,请在弱光条件下进行。

 

      《》Third,彗星分析的典型结果样式

 

彗星分析的典型结果样式

 

      如上图,左侧是健康的Jurkat细胞(未处理);右侧是使用20 uM Etoposide(依托泊苷)处理4小时的Jurkat细胞。【电泳条件:碱性电泳,15mins】

 

      说明书或者文献中的结果数据是否可以作为我自己实验的参考结果呢?

 

      这是一个很好的问题,也是问得最多的问题。但与ELISA不同,Comet Assay不提供对照,因为任何Comet Assay的结果都将根据实验条件而变化。 例如,如果电泳运行条件不同,则包含相同数量DNA损伤的细胞的尾巴大小可能会不同。 与我们的结果或其他研究人员的结果进行比较将毫无意义,因为两者之间的条件永远不会相同。如果您有兴趣测试化合物对DNA损伤的影响,建议使所有条件在实验之间保持一致,并使用相同的运行时间和软件进行分析。

 

      《》Fourth,彗星分析结果计算

 

      通过测量细胞核遗传物质(“彗头”)与产生的“尾巴”之间的位移,可以量化DNA损伤。 尾矩(Tail Moment)和尾巴DNA%(Tail DNA% )是分析彗星分析结果的两个最常见的参数。 每个样品至少应分析50 -100个细胞。考虑到遗传物质的迁移以及尾巴中DNA的相对数量,通常建议使用尾矩作为评估DNA损伤的指标。

      

彗星分析结果计算 Tail DNA% = 100 x Tail DNA 荧光强度/整个Cell DNA 荧光强度
尾矩(Tail Moment )可以使用以下方法之一进行测量:
1. 橄榄尾矩(Olive Tail Moment)= Tail DNA% x Tail Monent Length (头中心与尾中心之间的长度)【左图下】
2. 延伸尾矩(Extent Tail Moment) = Tail DNA% x Length of Tail【左图上】
建议使用软件的推荐参数进行测量

     

      有没有配套的彗星实验结果分析软件呢?

 

      这个还真有,小艾查阅了产品说明书,引用文献,已经彗星分析相关的发表文章,发现有如下3种主流的软件可用(均有文献)。根据您的经验和需求进行选择。

 

      *很遗憾,小艾也没有亲自做过此类实验,所以每次有小伙伴求指导的时候,我们也很为难,为了避免误导,只能尽力提供相关资料给您阅读了。

 

软件名称 说明 链接
OpenComet 免费;是Image J软件的一款彗星分析插件
CaspLab (CASP) 免费;独立软件
Comet Assay IV 付费软件;可试用1周

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