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Comet Assay Kits 彗星阐发试剂盒申明书

宣布者:艾美捷科技    宣布时候:2021-02-22     
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艾美捷科技,Cell Biolabs中国区总代办署理  

 

产物称号货号规格申明
Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片)
(最经常利用)
STA-35015 assays(5片)

STA-350.png

STA-35175 assays(25片)
STA-351-55*75 assays(5*25片)
Comet Assay Kits, 96-Well(96孔玻片)
(高通量挑选)
STA-35596 assays(1片)

STA-355.png

STA-355-55*96 assays(5片)

 

Comet-Assay-Kits-1.png

 

     *为便利客户利用试剂盒,艾美捷科技好心将其翻译成中文操纵手册,请以试剂盒中配套的英文版为准。因编者翻译程度无限,对由本申明书中不妥翻译所构成的丧失,概不担任,若有毛病,接待斧正!

     本申明书对应英文链接:http://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/STA-350-comet-assay-kit.pdf

 

尝试起头前,倡议先通读申明书(请以试剂盒中配套的英文版为准):

 

      先容:因为情况身分和细胞内一般的推陈出新进程,DNA毁伤天天以每一个细胞1000到100万个份子毁伤的速率发生。固然这只占人类基因组约60亿个碱基(30亿个碱基对)的一小局部,但关头基因的未修复毁伤能够会障碍细胞阐扬其功效的才能,并明显增添癌症的能够性。彗星尝试(Comet assay)也被称为单细胞凝胶电泳尝试(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一种超活络的单细胞程度上检测DNA毁伤的手艺。在电泳场下,毁伤的细胞DNA(包罗碎片和链断裂)从完全的DNA平分手出来,在显微镜下构成典范的“彗星尾巴”外形。DNA毁伤的程度凡是是经由进程丈量彗星尾巴来目测的,也能够利用图象阐发软件来丈量各种参数。

 

     OxiSelect™ Comet Assay是一种疾速、活络的,用于丈量细胞DNA毁伤的试剂盒。每一个试剂盒供给充足的试剂,最多可停止15次检测。

 

     OxiSelect™ Comet Assay尝试道理:Cell Biolabs 的 OxiSelect™ Comet Assay 是一种单细胞凝胶电泳法 (SCGE),用于简略评价细胞 DNA 毁伤。起首,将单个细胞与低熔点琼脂夹杂后,再利用到OxiSelect™ Comet特制玻片上。而后,用裂解缓冲液和碱性溶液处置这些嵌入的细胞,使DNA败坏并变性。最初,在电泳槽中对停止电泳,以分手完全的DNA和受损的片断。电泳后,样品被枯燥,用DNA染料染色,并经由进程外显荧鲜明微镜可视化。在这些前提下,受损的DNA(包罗裂解和链断裂)将比完全的DNA迁徙更多,并发生 "彗星尾 "外形(见图1)。

 

Comet-Assay-Kits-1.jpg

图1,彗星尝试道理与流程表示图

 

试剂盒组分(以STA-350,3孔板为例):

 

组分组分编码规格
OxiSelect™ 3-Well Comet Slides
特制3孔玻片(外表处置)
STA-3525片(每片上有3孔)
OxiSelect™ Comet Agarose
彗星尝试公用低熔点琼脂糖胶
23500215ml(1瓶,无菌)
Vista Green DNA Dye, 10000X
绿色荧光DNA染料,10000X
2350035ul(1支)
EDTA Solution, 500 mM
EDTA溶液,500mM
23500450ml(1瓶)
10X Lysis Solution
10X 裂解液
23500520ml(1瓶)

 

     客户自备资料:

     1.氯化钠粉末

     2.NaOH颗粒

     3.10 N NaOH,用于调剂pH值 (10 N NaOH = 10 M NaOH =10 mol/L NaOH)

     4.DMSO(可选)

     5.70%乙醇

     6.TE缓冲液(10mM Tris,pH 7.5,1mM EDTA)。

     7.PBS(不含Mg2+和Ca2+)。

     8.EDTA(二钠盐)

     9.DI H2O(去离子水)

     10.37ºC和滚水浴

     11.程度电泳槽

     12.可调理的单通道微量移液器,带一次性吸头。

     13.带FITC过滤器的外显荧鲜明微镜

 

     保管前提:收到试剂盒后,将绿色荧光DNA染料,10000X寄存在-20ºC。 一切其余试剂盒组件在室温下贮存。

 

《尝试步骤》以STA-350,3孔板为例

 

     为便利客户利用试剂盒,艾美捷科技好心将其翻译成中文操纵手册,请以试剂盒中配套的英文版为准。因编者翻译程度无限,对由本申明书中不妥翻译所构成的丧失,概不担任,若有毛病,接待斧正!本申明书对应英文链接:http://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/STA-350-comet-assay-kit.pdf

     一、试剂筹办:

 

     1.OxiSelect™ CometAgarose将Comet Agarose瓶放在90-95ºC水浴中加热20分钟,或直到琼脂胶液化。将瓶子转移到37℃的水浴中20分钟,并坚持直到利用。

 

     2.1X Vista Green DNA Dye任务液:利用TE缓冲液(10 mM Tris, pH 7.5, 1 mM EDTA)浓缩原10000X的Vista Green DNA Dye母液,根据1:10000的比例,浓缩成1X的Vista Green DNA Dye任务液。1X任务液可在4℃避光前提下保管3周。

 

     3.Lysis Buffer: 筹办100ml的1X 裂解缓冲液

 

NaCl14.6 g
EDTA Solution (试剂盒供给)20ml
10X Lysis Solution (试剂盒供给)10ml
DMSO10ml(样品中含血红素,则插手)
DI H2O(去离子水)调剂体积到90ml
充实夹杂以消融NaCl。迟缓插手10 M的NaOH来调理Lysis Buffer的pH值到10.0,最初再利用去离子水调剂体积,定容到100ml。冷藏裂解液到4℃,直到利用。
* Note: 缓冲液在室温下会看起来混浊,但在4ºC时会变清。pH也会坚持在约10.0。

 

     * 血红素在4℃成胶状,用DMSO消融的血红素。DMSO的增加是任选的,仅对含有血红素的样品(比方血细胞或构造样品)是必需的。插手DMSO对尝试成果不影响。

     4.Alkaline Solution筹办100ml的碱性溶液

 

NaOH1.2g
EDTA Solution (试剂盒供给)0.2ml
DI H2O(去离子水)调剂体积到100ml
充实夹杂以消融NaOH。冷藏碱性溶液到4℃,直到利用。

 

    5.Electrophoresis Running Solution: 筹办1L电泳缓冲液,须要挑选电泳形式(二选一)

 

电泳形式检测范例电泳时候申明
TBE电泳(中性电泳)检测单链双链DNA的断裂保举
10-15 mins
阐发细胞凋亡的首选体例,可利用尾巴长度而非尾矩停止数据阐发。
碱性电泳检测单链双链DNA的断裂,AP位点毁伤在内的一切DNA 毁伤保举
15-30mins
活络度最高!

 

     * 尝试进程中的各种缓冲液都须要4℃预冷。

 

     5.1 TBE Electrophoresis Solution (中性)

 

Tris Base10.8g
Boric Acid5.5g
EDTA(二钠盐)0.93g
DI H2O(去离子水)调剂体积到1L
充实夹杂以消融固体颗粒。冷藏TBE电泳缓冲液到4℃,直到利用。

     或5.2 Alkaline Electrophoresis Solution (300 mM NaOH, pH >13, 1 mM EDTA)(碱性)

 

NaOH12g
EDTA Solution (试剂盒供给)2ml
DI H2O(去离子水)调剂体积到1L
充实夹杂以消融NaOH。冷藏碱性电泳缓冲液到4℃,直到利用。

     特别申明:为防止紫外线对细胞样品构成额定侵害,请在弱光前提下停止尝试。

     二、筹办样品和玻片:

 

     1.筹办裂解缓冲液、碱性溶液和电泳缓冲液(见试剂筹办),而后再停止尝试。将一切溶液完全冷却至4ºC

 

     2.将OxiSelect™ Comet Agarose放在90-95ºC水浴中加热20分钟,或直到琼脂胶液化。将瓶子转移到37℃的水浴中20分钟停止冷却,并坚持直到利用。

 

     3.在OxiSelect™ Comet玻片上,每孔插手75 ul 37℃的Comet Agarose,构成下层胶用移液器将胶溶液涂抹在孔上,确保完全笼盖战争铺。将载玻片转移到4ºC下程度安排15分钟,使其固化。

 

     4.根据以下体例筹办细胞样品,与对比细胞:

 

     悬浮细胞:以700×g离心2mins,弃上清,用酷寒的PBS(无Mg2+和Ca2+)洗濯细胞一次,离心,弃上清。最初,用预冷4℃的PBS(无Mg2 +和Ca 2 +)重悬细胞到1×105个细胞/ml 。

 

     贴壁细胞:悄悄地从细胞培育瓶/培育皿中掏出细胞,用橡胶细胞刮处置。将细胞悬浮液转移到锥形管(EP)中,并在700×g离心2mins,弃上清。用酷寒的PBS(不含Mg2+和Ca2+)洗濯细胞一次,离心,并抛弃上清液。最初,用预冷4℃的PBS(无Mg2 +和Ca 2 +)重悬细胞到1×105个细胞/ml 。

    

     构造样品:利用剖解铰剪,切碎一小块构造到1-2ml酷寒的含20mM EDTA的PBS缓冲液(无Mg2 +和Ca 2 +)。构造/细胞悬浮液安排5分钟,而后将上清液转移到离心管中,防止转移碎片。700×g离心2mins,抛弃上清液。最初,用预冷4℃的PBS(无Mg2 +和Ca 2 +)重悬细胞到1×105个细胞/ml 。

 

     * 保举阳性对比:利用20 uM Etoposide(依靠泊苷)处置4小时。

 

     5.将细胞悬液Comet Agarose(步骤2)以1:10的比例(v/v),用移液枪夹杂平均,并当即转移75ul 到每一个孔中的原下层胶上方(步骤3)。确保完全笼盖平铺孔板,很是轻温和谨慎地用移液管尖传布的悬浮液,而不搅扰下层胶

 

    Note: 对多个样品的处置,将细胞与Comet Agarose夹杂液坚持在37℃,防止凝胶化。筹办好样品后,从头混匀,顺次掏出75ul插手到玻片孔中。

 

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     作为一家具备高真个手艺气力、进步前辈的运营办理程度和完美的市场发卖系统的生物高科技企业,总部位于武汉光谷高新手艺开辟区,办事面向天下。艾美捷科技是集入口试剂、尝试室耗材发卖、手艺办事与合约开辟为一体的专业化高科技公司,为用户供给专业的前沿资讯、完整的产物、整合的处理计划,及优良的物流办事。为了更好的办事客户,公司组建了一支经历丰硕的研发团队-艾美捷生物手艺中间,进入研发出产阶段,将更优良的产物保举给国际生物范畴的同仁们!

 

     艾美捷科技与国际外优异的生物试剂供给商优坚持着紧密亲密的协作干系,今朝已成为浩繁国际着名品牌的中国总代办署理或一级代办署理,首要包含:AmyJet、AAT Bioquest、Abbexa、Abnova、Agrisera、Anogen、Biosensis、Biovision、Caisson Labs、Cayman Chemical、Cell Biolabs、Cytoskeleton、Demeditec、Duchefa、Epigentek、Equitech-Bio、EXBio、Fitzgerald、GeneCopoeia、Hycult Biotech、ImmunoReagents、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、Mabtech、Matreya、Norgen Biotek、Origene、ProImmune、ProSpec、ScyTek、Solis BioDyne、SouthernBiotech、StressMarq、SySy、US Biological、TRC 等,能够在短时候内为用户供给专业的前沿资讯、完整的产物及物流办事。

 

 

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